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看得见的浸润 | 鲲石生物CAR-M体外3D评估模型成果发布
RocRock Bio发表时间:2023-12-12

近日,『鲲石生物』与『朴衡科技』的战略合作成果,以“DNA orgami assembled spheroid for evaluating cytotoxicity and infiltration of chimeric antigen receptor macrophage (CAR-M) ”为题,上传至生命科学预印本平台“bioRxiv”上,其链接https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2023.12.03.569750v1 在这项研究中,着重介绍了以3D NACs-origami组装的微肿瘤球体模型,用来评估CAR-M的靶向募集、杀伤和浸润能力,旨在为CAR-M的新靶点筛选和药效学评价提供一种有效的高通量验证平台。

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介绍


CAR-M的定义

近年来,CAR-T细胞疗法在血液系统恶性肿瘤患者中取得了巨大的成就,成功地获FDA的批准进入临床,这也标志着细胞治疗时代的开启。然而,它们在治疗实体瘤治疗方面却存在一些不足,如低浸润,肿瘤微环境间的异质性等,反而这些特点促使CAR-M成为新的替代方案。CAR-M的最大优势在于,免疫浸润和强大的杀伤能力,对实体瘤的治疗方面起着积极的作用。

 CAR-M的定义即是采用特异性CARs(一种合成的跨膜受体)修饰巨噬细胞,以提高巨噬细胞对实体瘤的靶向识别肿瘤抗原,发挥其强大的吞噬和杀伤效应。除此之外,CAR-M还具有促进抗原提呈能力和增强T细胞杀伤的作用,以及改善肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞表型的作用,进而实现对实体肿瘤的有效杀伤。

3D微肿瘤球体模型

3D NACs-origami assembled spheroid是以生物核酸材料为载体,结合DNA折纸技术(简称NAC-organ技术)开发的一种快速自组装3D微肿瘤球体模型。本文中,我们利用NAC-organ技术构建出了3D卵巢癌的肿瘤微球,无需基质胶支撑,且方便长期培养。通过PBMC浸润实验结果表明,该模型可有效模拟肿瘤细胞与免疫细胞之间的交互行为,使免疫细胞能够主动侵入肿瘤模型,从而精确地再现了肿瘤免疫微环境。


结果与讨论


二维共培养模型评估CAR-M


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(图一)

图一 吞噬效率评估 左图为基于荧光成像的吞噬评估,靶细胞SKOV3被标记染料pHrodoSE,当CAR-M与靶细胞共培养6 hr后,在显微镜下可明显观察到CAR-M组有较多的吞噬事件。右图为基于流式分析的吞噬评估,靶细胞SKOV3被标记染料FarRed,当与CAR-M与靶细胞共培养6 hr后,CAR-M细胞的吞噬比例明显高于对照组。

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(图二)


图二 杀伤能力评估 通过基于LDH方法(H)和基于Firefly luciferase方法(I),一致地表明CAR-M有明显的的杀伤能力,且随E/T和不同时间点,杀伤效果有所变化。随着E:T比增加,CAR-M的杀伤效果具有增强趋势。

总之,在二维共培养模型中的结果共同说明CAR-M具有显著的吞噬和杀伤作用。


PBMC与3D肿瘤微球互作形成肿瘤免疫微环境

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(图三)

图三 PBMC与3D肿瘤微球高通量互作模型(384孔板) 在3D微肿瘤模型构建24 hr后,分别加入小鼠PBMCs、PBMCs+免疫细胞抑制剂BLZ945、PBMCs+免疫刺激剂SEW2871,可观察PBMCs对3D微肿瘤球有侵袭行为。


CAR-M在3D肿瘤微球模型中的靶向、浸润和杀伤


画板 1 拷贝 4.png(图四)

图4 CAR-M细胞对3D肿瘤微球的靶向、浸润能力评估 将标记有GFP的M/CAR-M细胞分别加入3D肿瘤微球模型中,48 h后发现95%的CAR-M细胞侵入到3D肿瘤微球模型中,说明CAR-M对于3D肿瘤微球(SKOV3微球)模型中有较强的靶向募集和浸润能力。通过ATP和LDH检测,进一步证实CAR-M对3D肿瘤微球具有更强的杀伤能力。


总结

综上所述,我们建立了一种基于NACs-origami组装技术的三维肿瘤球体系统,用于体外评估CAR-Ms。更重要的是,该平台有利于CAR-Ms的其他靶点和其他肿瘤的验证,以及CAR-M联合疗法的评估,加速CAR-M的临床研究,为未来的临床治疗提供有利且可靠的证据。


参考文献

      DNA orgami assembled spheroid for evaluating cytotoxicity and infiltration of chimeric antigen receptor macrophage (CAR-M)来源doi: https://doi.org/10.1101/2023.12.03.569750


公司介绍

     鲲石生物专注于巨噬细胞药物治疗实体瘤开发和临床应用,是国内第一家具备基因编辑、生物材料和合成生物学驱动的工程化巨噬细胞技术平台。开创性地打造了全球首创的以巨噬细胞为核心的闭环产业链,具备批量打造基于CAR-M针对实体肿瘤管线的核心能力。


     朴衡科技专注于基于体外3D生理/病理模型的药物研发平台,以自主研发的全新体外3D培养技术(NAC-Organ技术)为基础,开发体外安全性、药效高通量筛选、评估平台。目前,建已立药物肝毒性及多种慢性肝病药效评估系统。针对肿瘤免疫细胞疗法开发的NAC-Solid Tumor平台,具有模拟免疫微环境、模拟不同细胞量级实体瘤的能力,可以用于肿瘤细胞靶向能力、肿瘤细胞杀伤能力的高通量检测。





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